Columna HPLC

La columna es el corazón de los procesos de separación de HPLC. La disponibilidad de una columna estable y de alto rendimiento es esencial para desarrollar un método resistente y reproducible. Específicamente, las diferentes columnas pueden variar en el número de placas, la simetría del pico, la retención, el espaciado de las bandas y la vida útil. En este ámbito, las columnas Zorbax de Agilent reúnen todas las condiciones para obtener métodos reproducibles y resistentes.

La mayoría de los empaques de columnas utilizados para las separaciones de HPLC utilizan una partícula de sílice (soporte). Las columnas basadas en soportes de polímeros porosos u otros materiales también están disponibles comercialmente para usar en ciertas separaciones. Sin embargo, debido a su uso generalizado, las partículas con un soporte de sílice y una capa superficial orgánica unida como C18 o C8 son las más utilizadas, especialmente por la industria farmacéutica. 

Fase Estacionaria

Los rellenos de fase reversa a base de sílice generalmente se fabrican uniendo covalentemente un organosilano o depositando una capa orgánica polimérica sobre la superficie del soporte. Los más utilizados son los rellenos con organosilanos que reaccionan en la superficie.

Especificaciones de la Columna

Los requisitos para una separación determinada suelen determinar el tipo y la configuración de la columna que se utilizará (tamaño de partícula, longitud, diámetro interno, etc.). Por lo tanto, se necesita cierta información sobre las especificaciones y el rendimiento de la columna para su uso en el desarrollo de métodos y la posterior operación de rutina. 

 Los requisitos de interés de la columna incluyen: 

• Número de plato N para un valor dado de k

 • Factor de asimetría de pico (A,) 

• Valor de selectividad (a) para dos solutos   diferentes

 • Contrapresión de columna 

•Reproducibilidad de retención (k) Concentración de fase ligada (si aplicable)